Elektroforeza v poliakrilamidnem gelu
Gel elektroforeza je temeljna tehnika v laboratorijih v bioloških disciplinah, ki omogoča ločevanje makromolekul, kot so DNA, RNA in proteini.Različni ločevalni mediji in mehanizmi omogočajo učinkovitejše ločevanje podmnožic teh molekul z izkoriščanjem njihovih fizikalnih značilnosti.Zlasti za beljakovine je elektroforeza v poliakrilamidnem gelu (PAGE) pogosto izbrana tehnika.
PAGE je tehnika, ki ločuje makromolekule, kot so proteini, na podlagi njihove elektroforetske mobilnosti, to je sposobnosti analitov, da se premikajo proti elektrodi z nasprotnim nabojem.V PAGE je to določeno z nabojem, velikostjo (molekulsko maso) in obliko molekule.Analiti se premikajo skozi pore, oblikovane v poliakrilamidnem gelu.Za razliko od DNK in RNK se beljakovine razlikujejo glede na vgrajene aminokisline, kar lahko vpliva na njihovo delovanje.Strune aminokislin lahko tvorijo tudi sekundarne strukture, ki vplivajo na njihovo navidezno velikost in posledično na to, kako se lahko premikajo skozi pore.Zato je morda včasih zaželeno denaturirati beljakovine pred elektroforezo, da jih lineariziramo, če je potrebna natančnejša ocena velikosti.
STRAN SDS
Elektroforeza v poliakrilamidnem gelu z natrijevim dodecil sulfatom je tehnika, ki se uporablja za ločevanje beljakovinskih molekul z maso od 5 do 250 kDa.Beljakovine ločimo izključno na podlagi njihove molekulske mase.Natrijev dodecil sulfat, anionsko površinsko aktivno sredstvo, je dodan pri pripravi gelov, ki prikrije intrinzične naboje vzorcev beljakovin in jim daje podobno razmerje naboja in mase.Preprosto povedano, denaturira beljakovine in jim daje negativen naboj.
Izvorna STRAN
Nativni PAGE je tehnika, ki za ločevanje beljakovin uporablja nedenaturirane gele.Za razliko od SDS PAGE pri pripravi gelov ni dodanega sredstva za denaturacijo.Posledično poteka ločevanje beljakovin na podlagi naboja in velikosti beljakovin.Pri tej tehniki so konformacija, zvijanje in aminokislinske verige proteinov dejavniki, od katerih je odvisna ločitev.Proteini se v tem procesu ne poškodujejo in jih je mogoče obnoviti po zaključku ločevanja.
Kako deluje elektroforeza v poliakrilamidnem gelu (PAGE)?
Osnovno načelo PAGE je ločevanje analitov s prehajanjem skozi pore poliakrilamidnega gela z uporabo električnega toka.Da bi to dosegli, je mešanica akrilamida in bisakrilamida polimerizirana (poliakrilamid) z dodatkom amonijevega persulfata (APS).Reakcija, ki jo katalizira tetrametiletilendiamin (TEMED), tvori mrežasto strukturo s porami, skozi katere se analiti lahko premikajo (slika 2).Višji kot je odstotek skupnega akrilamida, vključenega v gel, manjše so pore, zato bodo manjše beljakovine lahko prešle skozi.Razmerje med akrilamidom in bisakrilamidom bo prav tako vplivalo na velikost por, vendar je to pogosto konstantno.Manjše velikosti por prav tako zmanjšajo hitrost, s katero se majhni proteini lahko premikajo skozi gel, izboljšajo njihovo ločljivost in preprečijo, da bi ob dovodu toka hitro odtekali v pufer.
Oprema za elektroforezo v poliakrilamidnem gelu
Celica za gelsko elektroforezo (rezervoar/komora)
Rezervoar z gelom za elektroforezo v poliakrilamidnem gelu (PAGE) se razlikuje od rezervoarja z agaroznim gelom.Rezervoar z agaroznim gelom je vodoraven, medtem ko je rezervoar PAGE navpičen.Z navpično celico za elektroforezo (rezervoar/komora) se tanek gel (običajno 1,0 mm ali 1,5 mm) vlije med dve stekleni plošči in namesti tako, da je dno gela potopljeno v pufer v eni komori, vrh pa v pufer. v drugi komori.Ko je doveden tok, majhna količina pufra migrira skozi gel iz zgornje komore v spodnjo komoro.Z močnimi objemkami, ki zagotavljajo, da sklop ostane v pokončnem položaju, oprema omogoča hitre teke gela z enakomernim hlajenjem, kar ima za posledico razločne pasove.
Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) proizvaja celice za elektroforezo v poliakrilamidnem gelu (rezervoarji/prekati) različnih velikosti.Modela DYCZ-20C in DYCZ-20G sta vertikalni elektroforezni celici (rezervoarji/prekati) za analizo zaporedja DNA.Nekatere celice za navpično elektroforezo (rezervoarji/prekati) so združljive s sistemom blottinga, na primer model DYCZ-24DN, DYCZ-25D in DYCZ-25E sta združljivi z modelom sistema Western Blotting DYCZ-40D, DYCZ-40G in DYCZ-40F, ki se uporabljajo za prenos proteinske molekule iz gela v membrano.Po elektroforezi SDS-PAGE je Western Blotting tehnika za odkrivanje specifičnega proteina v proteinski mešanici.Te sisteme za blotiranje lahko izberete glede na eksperimentalne zahteve.
Napajalnik za elektroforezo
Za zagotovitev električne energije za delovanje gela boste potrebovali napajalnik za elektroforezo.Pri Liuyi Biotechnology ponujamo vrsto napajalnikov za elektroforezo za vse aplikacije.Modela DYY-12 in DYY-12C z visoko stabilno napetostjo in tokom lahko izpolnita zahteve visokonapetostne elektroforeze.Ima funkcijo stojala, merjenja časa, VH in uporabe po korakih.Idealni so za aplikacijo elektroforeze IEF in DNK sekvenciranja.Za splošno uporabo elektroforeze proteinov in DNA imamo modele DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 in tako naprej, ki so tudi vroče prodajni napajalniki s celicami za elektroforezo (rezervoarji/prekati).Uporabljajo se lahko za aplikacije srednje in nizkonapetostne elektroforeze, na primer za šolske laboratorije, bolnišnične laboratorije itd.Več modelov za napajalnike obiščite našo spletno stran.
Blagovna znamka Liuyi ima več kot 50-letno zgodovino na Kitajskem in podjetje lahko zagotovi stabilne in visokokakovostne izdelke po vsem svetu.Skozi dolgoletni razvoj je vreden vaše izbire!
Za več informacij o nas nas kontaktirajte po e-pošti[e-pošta zaščitena] or [e-pošta zaščitena].
Reference za Kaj je elektroforeza v poliakrilamidnem gelu?
1. Karen Steward PhD Elektroforeza v poliakrilamidnem gelu, kako deluje, različice tehnike in njene aplikacije
Čas objave: 23. maj 2022