Gelska elektroforeza je ena glavnih metod, ki se v molekularni biologiji uporablja za analizo DNK.Ta metoda vključuje migracijo fragmentov DNK skozi gel, kjer se ločijo glede na velikost ali obliko.Vendar, ali ste med poskusi elektroforeze že kdaj naleteli na napake, kot so razmazani trakovi na agaroznem gelu ali nobenih trakov na gelu?Kaj bi lahko bil vzrok za te napake?
Naši tehniki so tukaj za vašo referenco povzeli nekaj odpravljanja težav.
1. Razmazani trakovi na agaroznem gelu
●DNK je bil degradiran.Izogibajte se kontaminaciji z nukleazo.
● Pufer za elektroforezo ni svež.Po večkratni uporabi elektroforeznega pufra se ionska moč zmanjša, njegova pH vrednost pa se poveča, zato puferska kapaciteta oslabi, kar vpliva na učinek elektroforeze.Priporočljivo je pogosto zamenjati pufer za elektroforezo.
● Uporabljeni so bili neustrezni pogoji elektroforeze.Ne dovolite, da bi napetost presegla 20 V/cm, med elektroforezo pa vzdržujte temperaturo <30°C.Za elektroforezo z velikansko verigo DNA mora biti temperatura <15 °C. Preverite, ali ima pufer za elektroforezo zadostno kapaciteto pufra.
● Na gel je bilo naloženih preveč DNK.Zmanjšajte količino DNK.
● Preveč soli v DNK.Za napredno odstranitev odvečnih soli uporabite obarjanje z etanolom.
● DNK je bila kontaminirana z beljakovinami.Za napredno odstranitev beljakovin uporabite ekstrakcijo fenola.
● DNK je bila denaturirana.Pred elektroforezo ne segrevajte.Razredčite DNA v pufru z 20 mM NaCl.
2. Anomalije migracije pasov DNK
● Renaturacija mesta COS fragmenta λHind III.Pred elektroforezo segrevajte DNK 5 minut pod 65 °C in jo nato 5 minut ohladite na ledeni enoti.
● Uporabljeni so bili neustrezni pogoji elektroforeze.Ne dovolite, da bi napetost presegla 20 V/cm, med elektroforezo pa vzdržujte temperaturo <30°C.Preverite, ali ima pufer za elektroforezo zadostno kapaciteto pufra.
● DNK je bila denaturirana.Pred elektroforezo ne segrevajte.Razredčite DNA v pufru z 20 mM NaCl.
3. Šibki trakovi DNK na agaroznem gelu ali brez njih
● Na gel ni bila naložena zadostna količina ali koncentracija DNK.Povečajte količino DNK.Elektroforeza s poliakrilamidnim gelom je nekoliko bolj občutljiva od elektroforeze z agarozo in nalaganje vzorca je mogoče ustrezno zmanjšati.
● DNK je bila razgrajena.Izogibajte se kontaminaciji z nukleazo.
● DNK smo z elektroforezo odstranili iz gela.Gel izvajajte z elektroforezo krajši čas, uporabite nižjo napetost ali uporabite višji odstotek gela.
● Za vizualizacijo DNK, obarvane z etidijevim bromidom, je bil uporabljen neustrezen vir svetlobe W.Za večjo občutljivost uporabite svetlobo W s kratko valovno dolžino (254 nm).
4. Manjkajo trakovi DNK
●DNK majhne velikosti smo z elektroforezo odstranili iz gela.Gel izvajajte z elektroforezo krajši čas, uporabite nižjo napetost ali uporabite višji odstotek gela.
● Težko je razlikovati pasove DNK podobne molekule.Podaljšajte čas elektroforeze in preverite koncentracijogela, da zagotovite pravilen odstotek gela za uporabo.
● DNK je bila denaturirana.Pred elektroforezo ne segrevajte.Razredčite DNA v pufru z 20 mM NaCl.
● Niti DNK so ogromni in običajna elektroforeza v gelu ni primerna.Analizirajte s pulzno gelsko elektroforezo.Katere druge težave ste imeli z elektroforezo v agaroznem gelu?V prihodnosti bomo raziskovali več za vodnike.
Beijing Liuyi biotechnology Co., Ltd (Liuyi Biotech) je specializirano podjetje, ki se osredotoča na izdelke, povezane z elektroforezo, na Kitajskem.Njena zgodba se začne leta 1970, ko Kitajska še ni vstopila v čas reform in odpiranja.Skozi dolgoletni razvoj ima Liuyi Bitotech lastno blagovno znamko, ki je na domačem trgu izdelkov za elektroforezo znana kot blagovna znamka Liuyi.
Blagovna znamka Liuyi ima več kot 50-letno zgodovino na Kitajskem in podjetje lahko zagotovi stabilne in visokokakovostne izdelke po vsem svetu.Skozi dolgoletni razvoj je vreden vaše izbire!
Horizontalne celice za elektroforezo (rezervoarji/prekati) Liuyi Biotech so visoke kakovosti in dobrega videza.Z različnimi velikostmi pladnjev za gel lahko izpolnijo vaše različne eksperimentalne zahteve.Imamo svojo tehnično ekipo in tovarno.Od zasnove do izdelave, surovin do ključnih delov lahko nadzorujemo celoten proces.Serija DYCP 31 je za elektroforezo DNA, ki je modelDYCP-31BN, DYCP-31CN,DYCP-31DN, inDYCP-31E.Razlike med njimi so v velikosti gelov in ceni.Za naše stranke nudimo polne velikosti izdelkov.ModelDYCP-32Clahko naredi največji gel 250 mm * 250 mm.
Medtem priporočamo naš napajalnik za elektroforezoDYY-6C,DYY-6DinDYY-10Cza naše celice za elektroforezo (rezervoarji/prekati) serije DYCP-31 in 32.
Če želite več informacij o izdelkih, obiščite to spletno mesto, da dobite več, in dobrodošli, da nas kontaktirate po e-pošti, da nam sporočite, kaj želite, in preverite, ali lahko ponudimo rešitve za vas.
Za več informacij o nas nas kontaktirajte po e-pošti[e-pošta zaščitena], [e-pošta zaščitena].
Čas objave: maj-09-2022