Prejšnji teden smo delili več premislekov glede uporabe elektroforeze s celulozno acetatno membrano in danes bomo to temo končali za vašo referenco.
Izbor od Koncentracija pufra
Koncentracija pufra, ki se uporablja pri elektroforezi s celulozno acetatno membrano, je na splošno nižja od tiste, ki se uporablja pri elektroforezi s papirjem. Običajno uporabljen pH 8,6BArbitalni pufer je običajno izbran v območju od 0,05 mol/L do 0,09 mol/L. Pri izbiri koncentracije se izvede predhodna določitev. Na primer, če je dolžina membranskega traku med elektrodama v elektroforezni komori 8-10 cm, je potrebna napetost 25 V na centimeter dolžine membrane, jakost toka pa mora biti 0,4-0,5 mA na centimeter širine membrane. Če te vrednosti med elektroforezo niso dosežene ali presežene, je treba koncentracijo pufra povečati ali razredčiti.
Prenizka koncentracija pufra bo povzročila hitro premikanje trakov in povečanje širine trakov. Po drugi strani pa bo previsoka koncentracija pufra upočasnila selitev pasov, zaradi česar bo težko razlikovati nekatere ločilne pasove.
Upoštevati je treba, da pri elektroforezi s celulozno acetatno membrano precejšen del toka poteka skozi vzorec, kar ustvarja precejšnjo količino toplote. Včasih se izbrana koncentracija pufra lahko šteje za ustrezno. V pogojih povišane temperature okolja ali pri uporabi višje napetosti pa se lahko izhlapevanje vode zaradi toplote poveča, kar povzroči previsoko koncentracijo pufra in celo povzroči izsušitev membrane.
Obseg vzorca
Pri elektroforezi s celulozno acetatno membrano količino volumna vzorca določajo različni dejavniki, vključno s pogoji elektroforeze, lastnostmi samega vzorca, metodami obarvanja in tehnikami odkrivanja. Splošno načelo je, da bolj ko je detekcijska metoda občutljiva, manjši je lahko volumen vzorca, kar je ugodno za ločevanje. Če je volumen vzorca prevelik, vzorci elektroforetskega ločevanja morda ne bodo jasni, barvanje pa je lahko tudi zamudno. Vendar pa pri kvantitativni analizi ločenih obarvanih trakov z uporabo elucijskih kolorimetričnih detekcijskih metod volumen vzorca ne sme biti premajhen, saj lahko povzroči nižje vrednosti absorbance za nekatere komponente, kar povzroči večje napake pri izračunu njihove vsebnosti. V takšnih primerih je treba količino vzorca ustrezno povečati.
Običajno se volumen vzorca, dodan na vsak centimeter linije za nanašanje vzorca, giblje od 0,1 do 5 μL, kar ustreza količini vzorca od 5 do 1000 μg. Na primer, pri rutinski analizi elektroforeze serumskih beljakovin prostornina vzorca, dodana na vsak centimeter nanosne črte, običajno ne presega 1 μL, kar ustreza 60 do 80 μg beljakovin. Pri analizi lipoproteinov ali glikoproteinov z isto metodo elektroforeze pa je treba volumen vzorca ustrezno povečati.
Skratka, najprimernejšo količino vzorca je treba izbrati na podlagi posebnih pogojev z nizom predhodnih poskusov.
Izbira raztopine za barvanje
Ločeni pasovi pri elektroforezi celulozno acetatne membrane se običajno obarvajo pred detekcijo. Različne komponente vzorca zahtevajo različne metode obarvanja in metode obarvanja, primerne za elektroforezo s celulozno acetatno membrano, morda niso v celoti uporabne za filtrirni papir.
Obstajajo tri glavna načela za izbiro raztopine za barvanjemembrana iz celuloznega acetata. Prvič,Barvila, topna v vodi, bi morala imeti prednost pred barvili, topnimi v alkoholu, da bi se izognili krčenju membrane in deformaciji zaradi raztopine za barvanje slednjih. Po barvanju je pomembno, da membrano sperete z vodo in skrajšate čas barvanja. V nasprotnem primeru se lahko membrana zvije ali skrči, kar bi vplivalo na poznejše odkrivanje.
Drugič, za vzorec je bolje izbrati barvila z močno afiniteto za barvanje. Pri elektroforezi serumskih proteinov s celulozno acetatno membrano se pogosto uporablja amino črno 10B zaradi njegove močne afinitete za barvanje z različnimi komponentami serumskih beljakovin in njegove stabilnosti.
Tretjič, izbrati je treba zanesljiva kakovostna barvila. Nekatera barvila lahko kljub istemu imenu vsebujejo nečistoče, zaradi katerih je ozadje po barvanju posebno temno. To lahko celo zamegli prvotno dobro ločene pasove, zaradi česar jih je težko razlikovati.
Nazadnje je pomembna izbira koncentracije raztopine za barvanje. Teoretično se lahko zdi, da bi višja koncentracija raztopine za barvanje vodila do temeljitejšega barvanja komponent vzorca in boljših rezultatov barvanja. Vendar temu ni tako. Vezavna afiniteta med komponentami vzorca in barvilom ima določeno mejo, ki se ne povečuje s povečanjem koncentracije barvne raztopine. Nasprotno, previsoka koncentracija raztopine za barvanje ne le zapravlja barvo, ampak tudi otežuje doseganje čistega ozadja. Poleg tega, ko intenzivnost barve doseže določeno največjo vrednost, krivulja absorbance barvila ne sledi linearnemu razmerju, zlasti pri kvantitativnih meritvah. Pri elektroforezi s celulozno acetatno membrano je koncentracija raztopine za barvanje na splošno nižja od tiste, ki se uporablja pri elektroforezi s papirjem.
Podrobnosti, ki jih morate vedeti o Beijing Liuyi Biotechnology's membrana iz celuloznega acetatarezervoar za elektroforezo in njegovo uporabo za elektroforezo obiščite tukaj:
lPoskus za ločevanje serumskih beljakovin s celulozno acetatno membrano
lCelulozno acetatna membranska elektroforeza
lPri uporabi elektroforeze s celulozno acetatno membrano je treba upoštevati več vidikov (1)
Če imate kakršen koli načrt nakupa za naše izdelke, prosimo, ne oklevajte in nas kontaktirajte. Lahko nam pošljete sporočilo na e-pošto[e-pošta zaščitena]oz[e-pošta zaščitena]ali nas pokličite na +86 15810650221 ali dodajte Whatsapp +86 15810650221 ali Wechat: 15810650221.
Referenca:Elektroforeza (druga izdaja) g. Lija
Čas objave: jun-06-2023