Uvod
Gelska elektroforeza je temeljna tehnika v molekularni biologiji, ki se pogosto uporablja za ločevanje proteinov, nukleinskih kislin in drugih makromolekul. Ustrezen nadzor volumna vzorca, napetosti in časa elektroforeze je ključnega pomena za doseganje natančnih in ponovljivih rezultatov.Naš laboratorijski sodelavec ponujanajboljše prakse za upravljanje teh parametrov med gelsko elektroforezo SDS-PAGE.
Izdelki za gelsko elektroforezo Beijing Liuyi Biotechnology
Količina vzorca: Zagotavljanje doslednosti
Pri izvajanju elektroforeze SDS-PAGE je volumen vzorca ključni dejavnik, ki lahko pomembno vpliva na ločljivost vaših rezultatov. Na splošno je priporočljivo naložiti 10 µL skupnih beljakovin na vdolbinico. Da zagotovite doslednost in preprečite difuzijo vzorca med sosednjimi vdolbinicami, je pomembno, da v vse prazne vdolbinice naložite enako količino 1x nalagalnega pufra. Ta varnostni ukrep pomaga preprečiti širjenje vzorcev v sosednje pasove, do česar lahko pride, če vdolbino pustimo prazno.
Pred nalaganjem vzorcev vedno začnite z dodajanjem označevalca molekulske mase v eno vdolbino. To omogoča enostavno identifikacijo velikosti beljakovin po elektroforezi.
Nadzor napetosti: Izravnavanje hitrosti in ločljivosti
Napetost, uporabljena med elektroforezo, neposredno vpliva na hitrost, s katero vzorci migrirajo skozi gel, in na ločljivost ločevanja. Za SDS-PAGE je priporočljivo začeti z nizko napetostjo okoli 80 V. Ta začetna nizka napetost omogoča, da se vzorci premikajo počasi in enakomerno ter jih koncentrirajo v oster pas, ko vstopijo v ločevalni gel.
Ko vzorci v celoti vstopijo v ločevalni gel, se lahko napetost poveča na 120 V. Ta višja napetost pospeši migracijo in zagotovi, da so proteini učinkovito ločeni glede na njihovo molekulsko maso. Bistveno je spremljati napredovanje fronte bromofenol modrega barvila, ki kaže na zaključek elektroforeze. Za gele s koncentracijo 10-12 % običajno zadostuje 80-90 minut; pri 15 % gelih pa boste morda morali nekoliko podaljšati čas delovanja.
Upravljanje s časom: vedeti, kdaj se ustaviti
Čas je še en pomemben dejavnik pri gelski elektroforezi. Predolgo ali prekratko delovanje gela lahko povzroči neoptimalno ločevanje. Migracija bromofenol modrega barvila je koristen pokazatelj: ko doseže dno gela, je običajno čas, da se ustavi. Za standardne gele, kot je 10-12 %, običajno zadostuje trajanje elektroforeze približno 80-90 minut. Za gele z višjim odstotkom, kot je 15 %, je treba čas delovanja podaljšati, da se zagotovi popolna ločitev beljakovin.
Upravljanje medpomnilnikov: Ponovna uporaba in priprava medpomnilnikov
Pufer za elektroforezo lahko ponovno uporabite 1-2 krat, odvisno od posebnih pogojev vašega laboratorija. Vendar pa je za optimalne rezultate priporočljivo pripraviti svež pufer 10x in ga razredčiti tik pred uporabo. To zagotavlja, da pufer ohranja svojo učinkovitost, kar vodi do zanesljivejših rezultatov elektroforeze.
Izdelki za gelsko elektroforezo Beijing Liuyi Biotechnology
S skrbnim nadzorom volumna vzorca, napetosti in časa elektroforeze lahko bistveno izboljšate natančnost in ponovljivost rezultatov gelske elektroforeze. Izvajanje teh najboljših praks pri vašem laboratorijskem delu vam bo pomagalo doseči jasnejše in razločnejše pasove, kar vodi do boljših podatkov za nadaljnje analize.
Če imate več dobrih metod za optimizacijo eksperimenta z gelsko elektroforezo, vabljeni k razpravi z nami!
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) je že več kot 50 let specializirano za proizvodnjo instrumentov za elektroforezo z lastno strokovno tehnično ekipo in centrom za raziskave in razvoj. Imamo zanesljivo in popolno proizvodno linijo od zasnove do inšpekcije, skladišča in marketinške podpore. Naši glavni proizvodi so celica za elektroforezo (rezervoar/komora), napajalnik za elektroforezo, modri LED transiluminator, UV transiluminator, sistem za gelsko sliko in analizo itd. Dobavljamo tudi laboratorijske instrumente, kot so instrument PCR, vrtinčni mešalnik in centrifuga za laboratorij.
Če imate kakršen koli načrt nakupa za naše izdelke, prosimo, ne oklevajte in nas kontaktirajte. Lahko nam pošljete sporočilo na e-pošto[e-pošta zaščitena]oz[e-pošta zaščitena]ali nas pokličite na +86 15810650221 ali dodajte Whatsapp +86 15810650221 ali Wechat: 15810650221.
Optično preberite kodo QR, da jo dodate v Whatsapp ali WeChat.
Čas objave: 20. avgust 2024