Načelo
Elektroforeza s celuloznim acetatnim filmom je metoda elektroforeze, ki uporablja celulozni acetatni film kot nosilec. Pojav, pri katerem se nabiti delci pod vplivom električnega polja premikajo proti nasprotni elektrodi, imenujemo elektroforeza. Ker ima vsak protein določeno izoelektrično točko, bo protein, če ga postavimo v raztopino s pH nižjim od njegove izoelektrične točke, pozitivno nabit in se premakne proti negativni elektrodi. Nasprotno, premakne se na pozitivni pol. Ker je hitrost gibanja beljakovinskih molekul v električnem polju povezana z njihovim nabojem, obliko in velikostjo molekul, lahko z elektroforezo ločimo različne beljakovine. Serum vsebuje različne beljakovine, ki imajo vse izoelektrične točke pri pH 7,5 ali manj. Ko damo serum v pufer s pH 8,6 za izvedbo elektroforeze, so vsi serumski proteini negativno nabiti in se bodo v električnem polju premikali proti pozitivni strani. Ker imajo različni serumski proteini pri istem pH različne naboje, so molekularni delci različno veliki, s tem pa je tudi migracijska hitrost različna in jih ločimo z elektroforezo. Izoelektrične točke in molekulske mase serumskih beljakovin so prikazane v spodnji tabeli:
| Beljakovine | Izoelektrične točke (PI) | Molekulska teža |
| Albumin | 4.88 | 69 000 |
| α1-glulin | 5.00 | 200 000 |
| α2-glulin | 5.06 | 300 000 |
| β-glulin | 5.12 | 9 000 ~ 150 000 |
| γ-glulin | 6,85~7,50 | 156 000 ~ 300 000 |
Poskus je namenjen ločevanju različnih beljakovin v krvnem serumu s celulozno acetatno membrano (okrajšano CAM) kot nosilnim medijem. CAM je nekakšen penasti loosefilm z dobro enakomernostjo, debelina pa je 0,1 mm-1,5 mm, kar ima določeno absorpcijo vode.
Materiali, instrumenti in reagenti za CAM elektroforezo
Vzorci:zdrav človeški krvni serum
Instrument:napajalnik DYY-6C, rezervoar za elektroforezo DYCP-38C, vrhunsko polnjenje vzorca WD-9404
Reagenti
1) membrana iz celuloznega acetata 7X9 cm
2) Puferska raztopina barbitola PH 8,6 (ionska moč 0,05-0,09, to je 0,06 tid časa): vzemite 1,84 g dietil barbiturne kisline in nato vzemite 1,03 g dietil natrijevega pentobarbitala, dodajte nekaj destilirane vode, da segrejete, da se raztopi, in pripravite do 1000 ml;
3) Madež: Ponceau S 0,2 g, trikloroocetna kislina 3 g, dodajte 100 ml destilirane vode;
4) TBS/T ali PBS/T: 45 ml 95 % etanola, 5 ml ledocetne kisline, dodajte 50 ml destilirane vode;
5) Čistilna raztopina: 70 ml brezvodnega etanola, 30 ml ledocetne kisline.
Poskus Method
1) Pripravite membrano: membrano potopite v pufrsko raztopino barbitola za 30min-8h in jo vzemite ven, odstranite dodatno raztopino z vpojnim papirjem.
2) Nalaganje vzorcev: ločite hrapavo in gladko stran membrane in označite črto na razdalji 1,5 cm do zgornjega konca na hrapavi strani. Na grobo stran naložite vzorce z vrhunskim orodjem za nalaganje vzorcev. Opomba: vzorce je treba naložiti na hrapavo stran membrane. Ko vzorci seruma popolnoma prodrejo v membrano, obrnite membrano, položite hrapavo stran (z vzorci) obrnjeno navzdol proti rezervoarju in konec z vzorci postavite v negativno elektrodo.
3) Elektroforeza: Vklopite napajanje, 0,4～0,6m A/cm membrana, čas delovanja je 30-45 min. Po izvedbi elektroforeze izklopite napajanje.
4) Obarvajte in očistite: vzemite membrano iz rezervoarja in jo potopiteit v raztopino barvila za 5 minut, nato pa ga znova in znova očistite v čistilni raztopini 3-4 krat, dokler ni barva ozadja jasna. Serumske beljakovine morajo biti prikazane na trakovih in običajno je pet območij, ki tvorijo vrh do označene črte, albumin, α1-gloulin, α2-gloulin, β-gloulin, γ-gloulin.
5) Ohranjanje: postavite suho elektroforezobendv čistilni raztopini 10-15 minut, nato pa ga vzemite ven in nalepite na čisto steklo, ko se posuši, postane prozoren filmbend.
EksperimentirajteRezultat
Učinek ločevanja vzorcev seruma je dober in ni pojava trakovnega repa. Ponovljivost rezultatov je različna zaradi testnih postopkov in metod eksperimentatorja, ponovljivost pa je visoka.
Zaključek
Hitri klinični sistem zaznavanja elektroforeze (Rezervoar za elektroforezoDYCP-38C,napajanjeDYY-6C in vrhunsko nalaganje vzorcev WD-9404), ki ga proizvaja našpodjetje Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdizpolnjuje eksperimentalne zahteve,inrezultati so ponovljivi, enostavni in hitri, primerni zapoučevanjeraziskovanje.
Peking LiuyiBiotechnology Co., Ltd je specializirano za proizvodnjo izdelkov za elektroforezo za industrijo znanosti o življenju, kiima več kot 50-letno zgodovino na Kitajskem in podjetje lahko zagotovi stabilne in visokokakovostne izdelke po vsem svetu. Skozi leta razvoja je vreden vaše izbire!
Zdaj iščemo partnerje, tako rezervoar za elektroforezo OEM kot distributerji so dobrodošli.
Za več informacij o nas nas kontaktirajte po e-pošti[e-pošta zaščitena]oz[e-pošta zaščitena].
Čas objave: 14. nov. 2022