Comet Assay (Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE) je občutljiva in hitra tehnika, ki se uporablja predvsem za odkrivanje poškodb DNK in popravila v posameznih celicah. Ime »Comet Assay« izhaja iz značilne kometu podobne oblike, ki se pojavi v rezultatih: jedro celice tvori »glavo«, medtem ko se poškodovani fragmenti DNK selijo in ustvarijo »rep«, ki spominja na komet.
Načelo
Načelo Comet Assay temelji na migraciji fragmentov DNK v električnem polju. Nepoškodovana DNK ostane v celičnem jedru, medtem ko se poškodovana ali razdrobljena DNK seli proti anodi in tvori "rep" kometa. Dolžina in intenzivnost repa sta neposredno sorazmerni z obsegom poškodbe DNK.
Postopek
- Priprava celic: Celice za testiranje pomešamo z agarozo z nizkim tališčem in razporedimo po mikroskopskih stekelcih, da nastane enotna plast.
- Celična liza: Predmetna stekelca potopimo v raztopino za lizo, da odstranimo celično membrano in jedrno membrano, pri čemer se izpostavi DNK.
- elektroforeza: Predmetna stekelca postavimo v komoro za elektroforezo v alkalnih ali nevtralnih pogojih. Poškodovani delci DNA pod vplivom električnega polja migrirajo proti pozitivni elektrodi.
- Barvanje: Po elektroforezi se stekelca obarvajo s fluorescentnim barvilom (npr. etidijevim bromidom), da se vizualizira DNK.
- Mikroskopska analiza: S fluorescenčnim mikroskopom ali specializirano programsko opremo se analizirajo oblike kometov in izmerijo parametri, kot sta dolžina repa in intenzivnost.
Slika iz biorenderja
Analiza podatkov
Rezultati Comet Assay so ovrednoteni na podlagi več ključnih parametrov:
- Dolžina repa: Predstavlja razdaljo, ki jo DNK migrira, kar kaže na obseg poškodbe DNK.
- Vsebina DNK repa: Odstotek DNK, ki migrira v rep, ki se pogosto uporablja kot kvantitativno merilo poškodbe DNK.
- Olive Tail Moment (OTM): Združuje dolžino repa in vsebnost DNK v repu, da zagotovi bolj celovito merjenje poškodbe DNK.
Aplikacije
- Študije genotoksičnosti: Comet Assay se pogosto uporablja za ocenjevanje učinkov kemikalij, zdravil in sevanja na celično DNK, zaradi česar je ključno orodje za testiranje genotoksičnosti.
- Okoljska toksikologija: Pomaga pri analizi vpliva okoljskih onesnaževal na DNK organizmov in zagotavlja vpogled v varnost ekosistema.
- Medicinske in klinične raziskave: Comet Assay se uporablja pri preučevanju mehanizmov popravljanja DNK, raka in drugih bolezni, povezanih z DNK. Ocenjuje tudi vpliv terapij raka, kot sta radioterapija in kemoterapija, na DNK.
- Živilske in kmetijske vede: Uporablja se za oceno varnosti pesticidov, aditivov za živila in drugih snovi ter za preučevanje njihovih toksičnih učinkov na živalskih modelih.
Prednosti
- Visoka občutljivost: Sposobnost zaznavanja nizkih stopenj poškodb DNK.
- Preprosto delovanje: Tehnika je enostavna, zaradi česar je primerna za visoko zmogljivo presejanje.
- Široka uporaba: Uporablja se lahko za različne vrste celic, vključno z živalskimi in rastlinskimi celicami.
- Izzivi kvantifikacije: Medtem ko zagotavlja kvalitativne podatke o poškodbah DNK, se kvantitativna analiza v veliki meri opira na programsko opremo in tehnike analize slik.
- Eksperimentalni pogoji: Na rezultate lahko vplivajo dejavniki, kot sta čas elektroforeze in pH, kar zahteva skrben nadzor eksperimentalnih pogojev.
Omejitve
Comet Assay je neprecenljivo orodje v biomedicinskih raziskavah, znanosti o okolju in razvoju zdravil zaradi svoje prilagodljivosti in visoke občutljivosti pri odkrivanju poškodb in popravil DNK. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)ponuja horizontalno komoro za elektroforezo za test kometa. Dobrodošli v stiku z nami, da bi razpravljali oTest kometaprotokol.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) je že več kot 50 let specializirano za proizvodnjo instrumentov za elektroforezo z lastno strokovno tehnično ekipo in centrom za raziskave in razvoj. Imamo zanesljivo in popolno proizvodno linijo od zasnove do inšpekcije, skladišča in marketinške podpore. Naši glavni proizvodi so celica za elektroforezo (rezervoar/komora), napajalnik za elektroforezo, modri LED transiluminator, UV transiluminator, sistem za gelsko sliko in analizo itd. Dobavljamo tudi laboratorijske instrumente, kot so instrument PCR, vrtinčni mešalnik in centrifuga za laboratorij.
Če imate kakršen koli načrt nakupa za naše izdelke, prosimo, ne oklevajte in nas kontaktirajte. Lahko nam pošljete sporočilo na e-pošto[e-pošta zaščitena]oz[e-pošta zaščitena]ali nas pokličite na +86 15810650221 ali dodajte Whatsapp +86 15810650221 ali Wechat: 15810650221.
Optično preberite kodo QR, da jo dodate v Whatsapp ali WeChat.
Čas objave: 20. september 2024