Priprava vzorcev inNalaganje
Zaradi uporabe kontinuiranega puferskega sistema brez zlaganja gela v večini primerov morajo imeti vzorci ustrezno koncentracijo in majhen volumen. Uporabite apipetapočasi dodajajte vzorec, s 5-10 μg na vdolbino, da preprečite znatno zmanjšanje ločljivosti. kdajnalaganje vzorca, mora biti napajanje izklopljeno. Vzorec mora vsebovati indikatorsko barvilo (0,025 % bromofenol modro ali oranžno) in saharozo (10-15 %) ali glicerol (5-10 %), da povečamo njegovo gostoto, koncentriramo vzorec in preprečimo difuzijo. Vendar pa lahko včasih saharoza ali glicerol povzročita trakove v obliki črke U v rezultatih elektroforeze, čemur se lahko izognete z uporabo 2,5 % Ficoll (polivinilpirolidon).
elektroforeza
Napetost za elektroforezo je 5-15 V/cm, običajno okoli 10 V/cm. Za ločevanje velikih molekul mora biti napetost nižja, običajno ne presega 5 V/cm.
Barvanje
Fluorescentno barvilo etidijev bromid (EB) se običajno uporablja za barvanje za opazovanje trakov DNK v agaroznem gelu. EB se lahko vstavi med bazne pare molekul DNA, kar povzroči, da se EB veže z DNA. Absorpcija 260 nm ultravijolične svetlobe z DNA se prenese na EB in vezani EB oddaja fluorescenco pri 590 nm v rdeče-oranžnem območju spektra vidne svetlobe. Barvanje gela v 1 mmol/L raztopini MgSO4 za 1 uro lahko zmanjša fluorescenco ozadja, ki jo povzroča nevezani EB, kar olajša odkrivanje majhnih količin DNK.
Barvilo EB ima več prednosti: enostavno je za uporabo, ne razgradi nukleinskih kislin, ima visoko občutljivost in lahko obarva tako DNK kot RNK. EB lahko kadar koli dodate vzorcu in spremljate z uporabo UV absorpcije. Po obarvanju lahko EB odstranimo z ekstrakcijo z n-butanolom.
Vendar pa je barvilo EB močan mutagen, zato je treba med ravnanjem upoštevati previdnostne ukrepe, na primer nošenje polietilenskih rokavic. Akridin oranžna je tudi pogosto uporabljeno barvilo, saj lahko razlikuje med enoverižnimi in dvoverižnimi nukleinskimi kislinami (DNA, RNA). Kaže zeleno fluorescenco (530 nm) za dvoverižne nukleinske kisline in rdečo fluorescenco (640 nm) za enoverižne nukleinske kisline. Poleg tega se lahko za barvanje uporabljajo druga barvila, kot so metilen modro, metilen zeleno in kinolin B.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) je že več kot 50 let specializirano za proizvodnjo instrumentov za elektroforezo z lastno strokovno tehnično ekipo in centrom za raziskave in razvoj. Imamo zanesljivo in popolno proizvodno linijo od zasnove do inšpekcije, skladišča in marketinške podpore. Naši glavni proizvodi so celica za elektroforezo (rezervoar/komora), napajalnik za elektroforezo, modri LED transiluminator, UV transiluminator, gelski sistem za sliko in analizo itd.
Zdaj iščemo partnerje, tako rezervoar za elektroforezo OEM kot distributerji so dobrodošli.
Če imate kakršen koli načrt nakupa za naše izdelke, prosimo, ne oklevajte in nas kontaktirajte. Lahko nam pošljete sporočilo na e-pošto[e-pošta zaščitena]oz[e-pošta zaščitena]ali nas pokličite na +86 15810650221 ali dodajte Whatsapp +86 15810650221 ali Wechat: 15810650221.
Optično preberite kodo QR, da jo dodate v Whatsapp ali WeChat.
Čas objave: 20. december 2023