1. Razvrstitev
Gelsko elektroforezo delimo na navpične vrste (vključno s kolonastimi geli in ploščatimi geli) in vodoravne vrste (večinoma ploščati geli) (slika 6-18). Na splošno je vertikalna separacija nekoliko boljša od horizontalne, vendar ima horizontalna priprava gela vsaj štiri prednosti: obstaja podpora pod celotnim gelom, kar omogoča uporabo agaroze z nizko koncentracijo; možna je priprava plošč z agaroznim gelom različnih specifikacij; priprava gela in nalaganje vzorca sta bolj priročna; elektroforezno komoro je enostavno sestaviti in stroškovno učinkovito. Ker se vodoravna elektroforeza izvaja s ploščo z agaroznim gelom, ki je popolnoma potopljena približno 1 mm pod površino pufra za elektroforezo, se imenuje tudi potopljena elektroforeza.
Rezervoar za elektroforezo DYCP-31DN za elektroforezo v agaroznem gelu
2.Buffer sistem
Pri ločevanju nukleinskih kislin večina sistemov sprejme kontinuirane sisteme. Običajno uporabljeni pufri za elektroforezo vključujejo TBE (0,08 mol/L Tris·HCl, pH 8,5, 0,08 mol/L borove kisline, 0,0024 mol/L EDTA) pufer in THE (0,04 mol/L Tris·HCl, pH 7,8, 0,02 mol/L). natrijev acetat, 0,0018 mol/L EDTA) pufer. Ti pufri so običajno pripravljeni kot 10x osnovne raztopine in ob uporabi razredčeni na zahtevano koncentracijo. Hitrosti migracije linearne in krožne DNK v agaroznem gelu se razlikujejo glede na uporabljeni pufer. V pufru THE je stopnja migracije linearne DNK večja od hitrosti krožne DNK, medtem ko je v pufru TBE ravno obratno.
3. Priprava agaroznega gela
(1) Priprava vodoravnega agaroznega gela
(a) Pripravite zahtevano koncentracijo agaroznega gela z 1x pufrom za elektroforezo.
(b) Segrevajte agarozo, da se popolnoma raztopi v vreli vodni kopeli, na magnetnem mešalu ali v mikrovalovni pečici. Raztopino agaroze ohladite na 55 °C in dodajte barvilo etidijev bromid (EB) do končne koncentracije 0,5 μg/ml.
(c) Zaprite robove steklenih ali akrilnih plošč z majhno količino agaroznega gela, dodajte glavnik in postavite zobce glavnika približno 0,5–1,0 mm nad ploščo.
(d) Staljeno raztopino agaroznega gela neprekinjeno vlijte v stekleno ali akrilno ploščo (debelina je odvisna od prostornine vzorca DNK), pri čemer se izogibajte vnosu zračnih mehurčkov. Pustite, da se naravno strdi pri sobni temperaturi.
(e) Po popolnem strjevanju glavnik previdno odstranite. Dodajte ustrezno količino pufra za elektroforezo v posodo z gelom in zagotovite, da je plošča z gelom potopljena približno 1 mm pod površino pufra za elektroforezo.
(2) Priprava navpičnega agaroznega gela
(a) Odstranite maščobo ali ostanke s steklenih plošč z izpiranjem z etanolom.
(b) Namestite distančne plošče med sprednje in zadnje pregrade, poravnajte robove distančnih plošč s sprednjimi in zadnjimi pregradami in jih pritrdite s sponami.
(c) Dodajte 2 % agaroze v 1x pufru med robove distančnih plošč, da oblikujete 1 cm visok agarozni čep na dnu komore za vlivanje gela.
(d) Vlijte stopljeni agarozni gel v želeni koncentraciji, pripravljen v 1x pufru, v komoro za gel do 1 cm pod vrhom.
(e) Vstavite glavnik, pri čemer pazite, da se zračni mehurčki ne ujamejo pod zobce glavnika. Včasih se lahko med ohlajanjem agaroznega gela na zobeh glavnika pojavijo gube; v takšnih primerih preprosto dodajte nekaj stopljene agaroze na vrh, da se strdi.
(f) Odstranite glavnik. Da preprečite puščanje pufra v polnilni reži, zatesnite povezavo med ploščo z agaroznim gelom in elektroforezno komoro z 2 % agarozo in dodajte potrebno količino pufra.
(g) V gelsko komoro dodajte 1x pufer za elektroforezo.
(h) Previdno naložite vzorce DNK na agarozni gel pod pufrom.
Več informacij o osnovnem znanju o elektroforezi v agaroznem gelu bomo delili naslednji teden. Želimo, da bi vam bile te informacije v pomoč pri poskusu.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) je že več kot 50 let specializirano za proizvodnjo instrumentov za elektroforezo z lastno strokovno tehnično ekipo in centrom za raziskave in razvoj. Imamo zanesljivo in popolno proizvodno linijo od zasnove do inšpekcije, skladišča in marketinške podpore. Naši glavni proizvodi so celica za elektroforezo (rezervoar/komora), napajalnik za elektroforezo, modri LED transiluminator, UV transiluminator, gelski sistem za sliko in analizo itd.
Zdaj iščemo partnerje, tako rezervoar za elektroforezo OEM kot distributerji so dobrodošli.
Če imate kakršen koli načrt nakupa za naše izdelke, prosimo, ne oklevajte in nas kontaktirajte. Lahko nam pošljete sporočilo na e-pošto[e-pošta zaščitena]oz[e-pošta zaščitena]ali nas pokličite na +86 15810650221 ali dodajte Whatsapp +86 15810650221 ali Wechat: 15810650221.
Optično preberite kodo QR, da jo dodate v Whatsapp ali WeChat.
Čas objave: 7. december 2023